Potentially pathogenic Staphylococcus aureus and Listeria spp. in Brazilian unpasteurized cheese production / Staphylococcus aureus e Listeria spp. potencialmente patogênicos na produção de queijos não pasteurizados

This study aimed to identify potentially pathogenic microorganisms (Listeria innocua, L. seeligeri, L. ivanovii, L. monocytogenes, Staphylococcus aureus, and several virulence genes) in unpasteurized cheese production in the northeastern region of the state of São Paulo, Brazil. Listeria species were detected in 68 (64.14%) out of 106 samples of bovine feces, swabs from milkers' and cheese handlers' hands, milking buckets, raw milk, whey, water, cheese processing surface,s and utensils. All the samples collected at one farm were contaminated with Listeria spp. L. innocua, L. seeligeri, L. ivanovii, or L. monocytogenes were not detected in the samples collected in this study. A set of 391 Staphylococcus spp. isolates were obtained in these samples, from which 60 (15.31%) were identified as S. aureus using PCR (Polymerase Chain Reaction). S. aureus carrying virulence genes (eta, hlg, seg, seh, sei) were detected in milk, in swabs from cheese handler's hands, whey, milk, sieves, buckets, and cheese. The hlg gene (encodes gamma hemolysin) was detected in all the S. aureus isolates. These findings show that poor hygienic practice is associated with a higher risk of pathogenic bacteria in milk or cheese, providing useful information for public health authorities to increase food safety surveillance and prevent the dissemination of pathogens.

O objetivo desse estudo foi identificar microrganismos potencialmente patogênicos (Listeria innocua, L. seeligeri, L. ivanovii, L. monocytogenes, Staphylococcus aureus e diversos genes de virulência) na produção de queijos de leite cru na região noroeste do Estado de São Paulo, Brasil. Listeria foram detectadas em 68 (64,14%) das 106 amostras obtidas de fezes bovinas, suabes das mãos de ordenhadores e queijeiros, baldes, leite cru, soro, água, superfícies e utensílios da produção de queijos. Todas as amostras coletadas em uma fazenda estavam contaminadas com Listeria spp. L. innocua, L. seeligeri, L. ivanovii, e L. monocytogenes não foram detectadas nas amostras coletadas nesse estudo. Um conjunto de 391 isolados de Staphylococcus spp. foram obtidos das amostras, e desses 60 (15,31%) foram identificados como S. aureus pela PCR (Polymerase Chain Reaction). S. aureus contendo genes de virulência (eta, hlg, seg, seh, sei) foram detectados em leite, mãos dos ordenhadores, soro, utensílios e queijos. O gene hlg (gama-hemolisina)foi detectado em todos os isolados de S. aureus.Esses resultados demonstram que práticas inadequadas de higiene estão associadas com um maior risco da presença de bactérias patogênicas no leite e queijos crus, fornecendo informações para as autoridades de saúde pública para incrementarem a vigilância e prevenirem a disseminação de patógenos.

Detecção de Escherichia coli potencialmente patogênica em diferentes pontos da obtenção do leite e da elaboração de queijos tipo Minas Frescal / Detection of potentially pathogenic Escherichia coli from different points of milk obtaining and elaboration of Minas Frescal cheese

Os diferentes grupos de E. coli podem estar presentes no leite e seus derivados, que podem resultar em infecções em humanos. Este estudo objetivou isolar E. coli de diferentes pontos da obtenção do leite e da elaboração de queijos tipo Minas frescal, detectar os patótipos EAEC, EIEC, ETEC, EPEC, STEC, ExPEC e caracterizar os isolados pela pesquisa de genes de virulência . Para tanto, foram realizadas coletas em cinco pequenas propriedades rurais produtoras deste tipo de queijo no nordeste do estado de São Paulo. Foram coletadas amostras de suabes de fezes bovinas, de mãos de ordenhador, balde, leite, soro, água, superfície de elaboração de queijos, mãos de manipulador do queijo, peneiras, bandejas, fôrmas e escumadeiras. Foram obtidos 73 isolados de E. coli potencialmente patogênicos, sendo que nas amostras de leite e queijo foram encontrados isolados como STEC e ExPEC. Assim, a presença de cepas de E. coli potencialmente patogênicas na obtenção do leite e na produção do queijo constitui risco para a saúde pública.

Detecção de Listeria spp de importância em saúde pública em diferentes pontos da obtenção do leite e da elaboração de queijos tipo Minas Frescal / Detection of Listeria spp important in public health from different points of milk obtaining and elaboration of Minas Frescal cheese

Queijos tipo Minas frescal podem veicular microrganismos patogênicos. Este estudo objetivou isolar Listeria spp. e identificar as espécies L. innocua, L. seeligeri, L. ivanovii e L. monocytogenes na obtenção do leite e na elaboração de queijos tipo Minas frescal e detectar a presença de genes de virulência. Foram realizadas coletas em cinco pequenas propriedades rurais produtoras deste tipo de queijo em Jaboticabal-São Paulo. Foram coletadas amostras de suabes de fezes bovinas, amostras de mãos de ordenhador, balde de ordenha, leite, água, superfície de elaboração de queijos, mãos de manipulador do queijo, peneiras, bandejas, fôrmas e escumadeiras. O gênero Listeria spp. teve alta prevalência nas amostras, entretanto, nenhuma das espécies pesquisadas foi identificada. Assim, conclui-se que a presença de Listeria spp. em alta percentagem representa potencial risco de contaminação de Queijos tipo Minas frescal e exige uma vigilância contínua para a presença deste gênero.

Ocorrência de Bacillus cereus em leite em pó integral comercializado no estado de São Paulo, Brasil / Occurrence of Bacillus cereus in whole milk powder commercialized in the state of São Paulo, Brazil

Objetivou-se verificar se as populações de Bacillus cereus presentes em leite em pó integral apresentam-se de acordo com a legislação vigente e também verificar diferença entre a presença desse microrganismo de acordo com o tipo de embalagem (lata e papel laminado). Para isso, foram adquiridas 40 amostras de leite em pó integral comercializadas no município de Ribeirão Preto, Estado de São Paulo. Cerca de 20% das amostras analisadas continham populações de B. cereus. Entretanto, todas estavam dentro dos limites aceitos pela legislação. Não foi verificada diferença significativa quando analisadas as populações presentes entre as diferentes apresentações do produto. Conclui-se que todas as amostras avaliadas estavam de acordo com a legislação vigente e, portanto, não há problemas na comercialização de leite em pó integral na região avaliada.

Methicillin-resistant Staphylococcus spp. isolated from curd cheese “requeijão” and “especialidade láctea type requeijão” sold in Brazil / Isolamento de Staphylococcus spp. resistente à meticilina de queijos fundidos requeijão e especialidade láctea tipo requeijão comercializados no Brasil

ABSTRACT: This study focused on counting Staphylococcus spp. in curd cheeses “requeijão” and “especialidade láctea type requeijão” sold in Brazil, assessing the presence of mecA gene in obtained isolates and establishing antimicrobial resistance profile of the mecA gene positive isolates. To this, a set of 200 samples of these dairy products were evaluated. Low counts of Staphylococcus spp. were observed in these dairy products. All the isolates were determined as coagulase-negative strains using coagulase test and PCR. However, two isolates (3.70%) were carriers of mecA gene and they can be considered as risk for public health. These isolates presented resistance to penicillin, oxacillin and erythromycin. In conclusion, low counts of Staphylococcus were detected in curd cheese “requeijão” and “especialidade láctea type requeijão” sold in Brazil. However, coagulase-negative methicillin-resistant Staphylococcus spp. was detected in these dairy products. This is the first report of the detection of methicillin-resistant Staphylococcus spp. in heat-treated dairy products in Brazil. Results served as a warning to public sanitary authorities to control multidrug-resistant strains in veterinary and human medicine.

RESUMO: Este trabalho objetivou realizar a contagem de Staphylococcus spp. em queijos fundidos “requeijão” e “especialidade láctea tipo requeijão” comercializados no Brasil, verificar a presença do gene mecA nos isolados obtidos e estabelecer o perfil de resistência antimicrobiana dos isolados positivos para tal gene. Para isso, 200 amostras desses produtos lácteos foram avaliadas. Baixas contagens de Staphylococcus spp. foram observadas nas amostras. Todos os isolados foram considerados como coagulase-negativos através do teste da coagulase e através da PCR. Entretanto, em dois isolados (3,70%) foi possível detectar o gene mecA e representam potencial risco à saúde pública. Esses isolados apresentaram resistência a penicilina, oxacilina e eritromicina. Conclui-se que baixas contagens de Staphylococcus foram detectadas em queijos fundidos “requeijão” e “especialidade láctea type requeijão”. Entretanto, cepas de Staphylococcus spp. coagulase-negativas e resistentes à meticilina foram detectadas nesses derivados lácteos. Esse é o primeiro relato da ocorrência de cepas de Staphylococcus spp. resistentes à meticilina em produtos lácteos termicamente tratados comercializados no Brasil. Os resultados servem como um alerta para as autoridades sanitárias públicas nacionais para o controle de cepas multirresistentes em medicina veterinária e humana.

Microbial quality of industrial and retail market grated parmesan cheese in the State of São Paulo, Brazil / Comparação da qualidade microbiológica de queijos tipo parmesão ralados industrialmente e no comércio varejista no Estado de São Paulo, Brasil

ABSTRACT: With the objective to evaluate the hygienic and sanitary conditions of grated parmesan cheese acquired from the retail business, total 120 cheese samples were acquired: 60 of which were obtained from four different brands of cheese that were grated in factories, and the other 60 samples were obtained from another four brands of cheese that are normally acquired by retailers (supermarkets) in blocks and grated at the moment of sale. The population of heterotrophic mesophilic microorganisms ranged from 1.2×10³ to 1.1×107 colony-forming units (CFU)·g-1. All samples analyzed contained Staphylococcus spp. with populations varying from 1.2×10³ to 8.7×106CFU·g-1, from which 60.0% were classified as coagulase-positive Staphylococcus and 52.5% of the samples possessed populations above the permissible limit set by legislation. Staphylococcus aureus was detected in 57.5% of the samples. Population of molds and yeasts varied from <10 to 1.8×106CFU·g-1. Salmonella spp. was not isolated in this research. A difference was observed between the parmesan cheese grated in factories and that grated in supermarkets, where the former presented better microbiological quality than the latter. Thus, procedures must be proposed to minimize the presence of pathogenic agents reported in grated parmesan cheeses evaluated in the present study because of the public health risk associated with food bacterial contamination.

RESUMO: Com o objetivo de avaliar as condições higiênicas e sanitárias de queijos tipo parmesão ralados, vendidos no comércio varejista, foram realizadas análises microbiológicas em 120 amostras, sendo 60 destas de quatro marcas comerciais, as quais foram raladas industrialmente e outras 60 de quatro marcas, cujos queijos foram adquiridos pelos comércios varejistas em grandes peças e ralados no ato da venda. As populações de microrganismos heterotróficos mesófilos variaram de 1,2×10³ a 1,1×107UFC.g-1. Todas as amostras analisadas apresentaram Staphylococcus spp., com populações que variaram de 1,2×10³ a 8,7×106UFC.g-1, sendo que 60,0% dessas apresentaram Staphylococcus coagulase positivo e 52,5% delas com populações acima do limite estabelecido pela legislação. A presença de Staphylococcus aureus foi identificada em 57,5% das amostras. As populações de bolores e leveduras apresentaram variação de <10 a 1,8×106UFC.g-1 . Salmonella spp. não foi isolada no presente trabalho. Houve diferença entre os queijos ralados industrialmente e os queijos ralados nos supermercados, sendo que o primeiro grupo apresentou resultados de qualidade microbiológicas melhores do que o segundo grupo. Assim, medidas visando minimizar as populações de agentes contaminantes e deteriorantes encontradas nos queijos parmesão analisados no presente trabalho devem ser realizadas, visto que estas podem representar um risco à saúde pública.

Antimicrobial Resistance and Virulence Factors of Escherichia coli in Cheese Made from Unpasteurized Milk in Three Cities in Brazil.

The production of cheeses from unpasteurized milk is still widespread in Brazil, even with a legal ban imposed on its marketing. The manufacture of this cheese is a public health problem, due to the use of raw milk and the poor hygienic conditions throughout the supply chain process. Contamination may occur from several sources and involve several different pathogenic microorganisms, such as Escherichia coli. The latter can cause different clinical manifestations depending on the pathotype involved. Furthermore, some isolates manifest antimicrobial resistance and may be a risk for public health. The purpose of the current study was to investigate the presence of potentially pathogenic E. coli in raw-milk cheese in Brazil and their possible risk to public health. A total of 83 cheeses were collected from three different cities and 169 E. coli isolates were characterized for the presence of enteropathogenic E. coli, Shigatoxigenic E. coli, enterotoxigenic E. coli, extraintestinal pathogenic E. coli (ExPEC) virulence genes, phylogenetic type, antimicrobial resistance, O serogroup, and pulsed-field gel electrophoresis. The number of samples positive for E. coli was highest in Aracaju (90.32%, 28/31). The prevalence of samples positive for potential ExPEC genes was similar for Uberaba and Aracaju (23.07%); the most prevalent ExPEC virulence genes were tsh, iucD, and papC. Isolates from Uberaba had a higher prevalence of resistance to tetracycline (38.46%), amoxicillin/clavulanic acid (58.85%), and ampicillin (61.54%) than the other cities. Overall, antimicrobial resistance genes tetB, blaTEM, and blaCMY-2 were the most prevalent genes (26.32%, 15.79%, and 28.95%, respectively) and the most prevalent serotypes were O4 (8%), 018 (12%), and O23 (8%). Clones originating from the same regions and from different regions were observed. These results emphasize the presence of a potential danger for humans in the consumption of raw-milk cheeses in three cities in Brazil due to the presence of antimicrobial resistance, which should be monitored.

Cisticercose suína e bovina - ocorrência em abatedouros do Estado de São Paulo, Brasil / Swine and bovine cysticercosis ­ occurrence in slaughterhouses located at São Paulo State, Brazil

Objetivou-se determinar a frequência de ocorrência da cisticercose em carcaças suínas e bovinas em 56 abatedouros sob fiscalização do Serviço de Inspeção do Estado de São Paulo (SISP) durante os anos 2008 a 2013. Para os 1.305.723 suínos abatidos no período foram detectados cisticercos em apenas 125 (0,01%) animais, dos quais 116 (92,80%) estavam calcificados. Determinou-se que dos 1.434.445 bovinos, 24.278 (1,69%) apresentaram cisticercos, dos quais 19.826 (81,67%) apresentavamse calcificados. Também se observou uma relação inversa (P < 0,05) entre as variáveis tempo e frequência de ocorrência. A maior ocorrência nessa espécie evidencia que são necessárias melhorias nas práticas sanitárias preventivas durante a criação desses animais, como a adoção das Boas Práticas Agropecuárias (BPA) para reduzir a ocorrência da cisticercose a níveis baixos igualmente observados para os suínos.

This study was focused on the determination of cysticercosis prevalence in swine and cattle carcasses in 56 slaughterhouses under supervision from Inspection Service of São Paulo State (SISP) between the years 2008 and 2013. Amongst the 1,305,723 pigs slaughtered, cysticercosis was present in only 125 (0.01%) of them in which, 116 (92.80%) were calcified. Nonetheless, cysticercosis was present in 24,278 (1.69%) of the 1,434,445 bovine carcasses evaluated; 19,826 (81.67%) were calcified. An inverse relationship (P <0.05) between time and the disease occurrence variable was observed. Sanitary preventive practices improvements, such as the Good Agricultural Practices, are required during the cattle rearing in order to decrease the cysticercosis occurrence to low prevalence levels as observed in swine rearing.

Sorologia e suscetibilidade antimicrobiana em isolados de Escherichia coli de pesque-pagues / Serology and patterns of antimicrobial susceptibility in Escherichia coli isolates from pay-to-fish ponds

Pesquisou-se a ocorrência de Escherichia coli (EPEC, EIEC, O157) em água e peixe (pele, trato digestivo e músculo) de pesque-pagues da microbacia do Córrego Rico, Jaboticabal (SP). Foram isoladas 115 cepas de E. coli, entre as quais 49 (43%) foram sorogrupadas como EPEC. Os sorogrupos mais frequentes foram O125, O126 e O158. Dentre as amostras testadas, 60 (52%) apresentaram resistência simultânea a dois antimicrobianos. A análise de correspondência foi realizada com o intuito de verificar as possíveis correspondências envolvendo o local de isolamento, sorogrupos e multirresistência e, com isso, pôde-se observar que o músculo apresentou menor correspondência com os demais fatores analisados. Porém, o isolamento de sorogrupos EPEC neste estudo representa risco à saúde dos consumidores.(AU)

The occurrence of Escherichia coli (EPEC, EIEC and O157) in water and fish (skin, gut and muscle) in pay-to-fish ponds of the micro bay of Córrego Rico, in Jaboticabal (SP), was assessed. One hundred and fifteen strains of E. coli were isolated, and 49 (43%) were serogrouped as EPEC. The most common serogroups were O125, O126 and O158. Among the tested samples, 60 (52%) showed simultaneous resistance to two antimicrobials. A correspondence analysis was performed to assess possible correlations involving the site of isolation, serogroups and multi-resistance. The results of this analysis showed that the muscle was less correlated with the the other factors. However, the isolation of EPEC serogroups in this study demonstrates a risk to public health.(AU)